NADP苹果酸酶(NADP-ME)检测试剂盒操作方法！
测定意义：ME广泛存在于微生物、培养细胞、动物和植物胞浆中，尤其在植物组织中活性较高。ME催化苹果酸氧化脱羧的可逆反应，产生丙酮酸和CO2，以及伴随NAD(P)+的还原反应，是苹果酸代谢的关键酶。ME活性与生物合成和抗氧化密切相关。近年来植物ME活性测定较多，已经成为抗氧化研究的热点。根据辅酶专一性和对底物特异性的不同，可将ME分为NAD-ME(EC1.1.1.38)和NADP-ME(EC1.1.1.40)。
测定原理：NADP-ME催化NADP+还原成NADPH，在340nm下测定NADPH增加速率。
测定步骤：
1、紫外分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
2、将试剂一在 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）中保温 15min 左右。
将上述试剂按顺序加入微量石英比色皿/96 孔 UV 板中混匀，在 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种），340 nm 波长下记录初始吸光度 A1 和反应 1min 后的吸光度 A2，计算ΔA=A2-A1。
注意事项：
1、若 A2-A1 大于 0.5，需将酶液用提取液稀释，使 A2-A1 小于 0.5，可提高检测灵敏度。
2、实验时，试剂三、试剂四和样本在冰上放置，以免变性和失活。试剂一 37℃或 25℃水浴放置。
3、比色皿中反应液的温度必须保持 37℃或 25℃，取小烧杯一只装入一定量的 37℃或 25℃蒸馏水，将此烧杯放入 37℃或 25℃水浴锅中。在反应过程中把比色皿连同反应液放在此烧杯中。用 96孔板做时尽量保持反应温度在 37℃或 25℃。
4、两个人同时做此实验，一个人比色，一个人计时，以保证实验结果的准确性。用 96 孔板做时尽量做到样本反应时间一致。
5、如果ΔA＜0.01，可将反应时间延长 5 分钟或 10 分钟。
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NADP苹果酸酶(NADP-ME)检测试剂盒操作方法！ 原创作者：南京信帆生物技术有限公司
