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血液线粒体提取试剂盒新配方升级现货供应

阅读次数:557    发布时间:2020/4/27 11:47:06

血液线粒体提取试剂盒新配方升级现货供应


说明

本试剂盒可用于从血液中分离完整而纯化的线粒体。

其制备物,可以被用于细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究。但不适用于进一步DNA提取。

操作步骤

1. 血液处理:

血液要求:非肝素钠抗凝血,使用新鲜血液。对于陈旧血液,由于冻凝过程中冰晶已经对细胞核膜和线粒体膜产生损伤,所以线粒体得率会大大减少,并且完整性也会降低。

a. 对于无核红细胞全血(如哺乳动物处周血),取血约5ml(适当分成几管),加入3倍体积的红细胞裂解液(稀释后的工作液,下同),混匀,800 × g  5 min离心收集白细胞。加入1-2ml红细胞裂解液(稀释后的工作液),吹打重悬白细胞,合并于一管中,800 × g 5~10 min离心收集白细胞。此时如果白细胞有可见红色,可再次用少量(0.5ml)红细胞裂解液洗细一次。

b. 对于有核红细胞全血(如禽类全血),取约200-300ul全血,800 × g 5~10 min离心收集全细胞,用生理盐水或者PBS清洗两次,留沉淀去上清。清洗时请用去尖吸头吹打。

2. 在收集到的细胞中,加入1.0 mL冰预冷的白细胞裂解液重悬细胞,将细胞悬液转移到小容量玻璃匀浆器内,0℃冰浴研磨20~40次;

3. 匀浆物转移到离心管,4℃,1000× g 离心5 min;

4. 取上清,加入一新的离心管中,4℃,1000× g 再次离心5 min(一共两次离心,完整去核)。

5.取上清,加入一新的离心管中,4℃, 12,000 × g 离心10 min。离心后的上清含胞浆成分,可从中提取胞浆蛋白。将上清转移到新离心管,线粒体沉淀在管底;


6. 在线粒体沉淀中加入0.5 mL 线粒体清洗液重悬线粒体沉淀,4℃,1000× g 离心5 min(再次去核);

7.取上清,加入一新的离心管中,4℃, 12,000 × g 离心10 min。弃上清,高纯度的线粒体沉淀在管底;

8. 用50 -100μL线粒体保存液或合适的反应缓冲液重悬线粒体沉淀,立即使用或-70℃保存。

注意事项

为保证获得完整及尽可能多的线粒体,匀浆条件要示:是全程低温操作。第二是快速。第三,如有条件可将匀浆后的碎片在显微镜下观察。

 

一般低温度心机都有离心力显示,如果没有,可以用以下公式简单的换算。

G=1.11×(10-5)×R×[rpm]
G为离心力,一般以g(重力加速度)的倍数来表示; [rpm] 即:转速的平方; R为半径,单位为厘米。


血液线粒体提取试剂盒新配方升级现货供应

原创作者:南京信帆生物技术有限公司

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