DNS试剂(Ghose法)检测原理

阅读次数：261 发布时间：2024/3/14 13:14:27

DNS试剂(Ghose法)检测原理

产品简介：

Ghose法DNS试剂。又称3,5-二硝基水杨酸法或简称DNS法,DNS试剂是植物总糖和还原糖检测(硝基水杨酸法)的成分,定量检测植物组织样品中的总糖和还原糖的含量。

检测原理是还原糖在碱性条件下被氧化成糖酸，3,5-二硝基水杨酸被还原为棕红色的氨基化合物。在一定范围内，还原糖的量与棕红色产物的颜色深浅程度呈一定比例关系。在540nm处测定棕红色物质的吸光度，该吸光度值与还原糖含量呈线性关系。

【产品名称】：DNS试剂(Ghose法) 【产品规格】：500ml

【储存条件】：2-8℃

【有效期】：12个月

操作步骤(仅供参考)：

1、还原糖的提取：

①称取植物样品0.5~3g，剪碎，加入蒸馏水约3ml匀浆，转移至烧杯或三角瓶中，用12ml蒸馏水冲洗研磨器2~3次，洗出液也转移至该容器②50℃水浴30min，并不时搅拌，以便还原糖彻底浸出

③将沉淀和浸出液转移至50ml离心管，4000g离心5min。

④留取上清液，向沉淀中加入20ml蒸馏水，混匀，再次4000g离心5min。

⑤留取上清液，将2次获得的上清液合并，用蒸馏水定容至100ml(提取液)，混匀，作为还原糖待测液。

2、总糖的水解和提取：

①称取植物样品0.5~3g，剪碎，加入蒸馏水约3ml匀浆，转移至烧杯或三角瓶中，用12ml蒸馏水冲洗研磨器2~3次，洗出液也转移至该容器。

②向容器中加入10ml 6M盐酸溶液，搅拌均匀，煮沸30min，并不时搅拌。

③取2滴滴加于载玻片上，滴加1滴显色液，检查水解是否完全，如已经水解完全则不显示蓝色。

④水解完毕后，冷却至室温，加入6M氢氧化钠溶液，使溶液pH至7.4左右，用蒸馏水定容至100ml，混匀，4000g离心5min或过滤，获得上清或滤液。

⑤取上清或滤液10ml，用蒸馏水定容至100ml，成稀释10倍的总糖水解液(提取液)，取1ml总糖水解液，测定其还原糖的含量。

注意事项：

1、该试剂避免反复冻融，以免失效或效率下降，尽量避光保存。

2、稀释盐酸和氢氧化钠溶液时，应小心操作，避免伤人。

3、一般市售的浓盐酸摩尔数约为11.6M，应稀释至6M后使用。

4、待测样本如不能及时测定，应置于2~8℃保存，3天内稳定。

5、如果样品还原糖浓度过高，应用蒸馏水稀释后重测，结果乘以稀释倍数。6、总糖计算公式在测定干扰杂质很少、还原糖含量相对总糖含量很少时使用，×0.9是为了从测定出的总糖水解成单糖中，扣除水解时所消耗的水量。