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溶菌酶检测试盒说明书

阅读次数:971    资料下载    发布时间:2018/4/23 17:14:41

 一、测定原理:
在一定浓度的混浊菌液中,由于溶菌酶能水解细菌细胞壁上肽聚糖使细菌裂解而浓度降低,透光度增强,故可以根据透光度变化来推测溶菌酶的含量。

二、试剂组成及配制 (30T/28样)
1、试剂组成:
试剂一:菌粉,5mg×4支,2~8℃干燥保存,有效期6个月。
试剂二:菌粉溶剂,100ml×1瓶,2~8℃保存,并每月放微波炉中温消毒20秒,有效期6个月。
试剂三:标准品,粉剂2mg×1支(活力为8万单位/mg),2~8℃干燥保存,有效期6个月。
[注]:试剂盒严格按照上述方法保存有效期可延至一年。
2、试剂配制:
(1)、贮备菌液的配制:
取5mg/支的菌粉1支,倒入匀浆管中,加菌粉溶剂1ml,轻轻缓慢上下旋转研磨3分钟(切勿溅出),即为贮备菌液,将其取出后置2~8℃冰箱密封保存一周左右。
(2)、应用菌液的配制:
按贮备菌液:菌粉溶剂=1:19进行配制,需多少配多少。剩下的应用菌液2~8℃可保存一周左右。是现用现配,用时摇匀。
(3)、标准品的配制:
①、标准品贮备液的配制:
每支准确加双蒸水1.0ml配成2mg/ml的标准品贮备液。2~8℃可保存7~10天。
②、标准品应用液的配制:
临用时按标准品贮备液∶双蒸水=1∶799比例稀释成2.5μg/ml(即200U/ml)的标准品应用液,需多少配多少。2~8℃保存,可保存7~10天。

操作步骤
①、将配制好的应用菌液,标准应用液及所需检测的样本均放入37℃水浴箱中预温5分钟
以上。使菌液,标准液及检测样本的温度达到37℃。
②、将可见分光光度计于530nm处,1cm光径比色皿,以双蒸水调透光度100% (比色皿准备两只,一只用于调透光度100%,一只用于测定)。
③、往相应编号的试管中加入0.2ml待测样本,取2ml应用菌液迅速冲入试管中,立即混匀并计时。(标准品应用液取0.2ml双蒸水,加入2ml应用菌液,其它操作与测定相同)
④、迅速倒入比色皿中在可见分光光度计530nm处比浊,5秒时读取透光度值T0, 比色皿不要取出,在2 分5秒时读取透光度值T2;
[注]:如5秒时来不及读数,可20秒时读取调透光度值T0,在2 分20秒时读取透光度值T2,标准管需同样操作。
⑤、求出2次透光度的差值(△T= T2-T0)。
[

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