小鼠花生四烯酸（AA ）酶联免疫分析

阅读次数：1097 资料下载发布时间：2019/8/13 9:39:34

小鼠花生四烯酸（AA ）酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围： 96T
0.6 pmol/L -16 pmol/L
使用目的：
本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中花生四烯酸（AA）含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠花生四烯酸（AA）水平。用纯化的小鼠花
生四烯酸（AA）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入花生四烯
酸（AA），再与 HRP 标记的花生四烯酸（AA）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，
经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下
转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的花生四烯酸（AA）呈正相关。用酶标仪在 450nm
波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中小鼠花生四烯酸（AA）浓度。
试剂盒组成
1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶
2 酶标试剂 6ml×1 瓶 8 标准品（32 pmol/L） 0.5ml×1 瓶
3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 标准品稀释液 1.5ml×1 瓶
4 样品稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1 份
5 显色剂 A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 张
6 显色剂 B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 个
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
16 pmol/L 5 号标准品 150µl 的原倍标准品加入 150µl 标准品稀释液
8.0 pmol/L 4 号标准品 150µl 的 5 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
4.0 pmol/L 3 号标准品 150µl 的 4 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
2.0 pmol/L 2 号标准品 150µl 的 3 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
1.0 pmol/L 1 号标准品 150µl 的 2 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50µl，待测样品孔中先加样品稀释液 40µl，
然后再加待测样品 10µl（样品*终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽
量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此
重复 5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50µl，空白孔除外。
7. 温育：操作同 3。
8. 洗涤：操作同 5。
9. 显色：每孔先加入显色剂 A50µl，再加入显色剂 B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
10 分钟.
10. 终止：每孔加终止液 50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止
液后 15 分钟以内进行。

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