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TEV蛋白酶的应用

阅读次数:190    发布时间:2024/7/1 16:06:46

TEV蛋白酶的应用

 

rTEV 蛋白酶(重组型)是经过基因工程改造后的重组蛋白酶,该酶特异性识Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe- Gln-Gly 七氨基酸序列。rTEV 蛋白酶与肠激酶 U(EK)ThrombinFactorXaSUMO 等蛋白酶相比,具有高活性、高特异性的双重特点,rTEV 蛋白酶因具高剪切活性和特异性,已成为融合蛋白表达后去除融合 tag 的蛋白酶。该酶经 6×His 标签纯化而得(含组胺酸标签),纯度达99%, 剪切反应完毕后可通过His标签纯化树脂Ni-NTA Resin(Cat.No. P2010)去除,以达到纯化目的蛋白的目的。

 

影响天然TEV酶活性的常见因素:1PMSFAEBSF1 mM),TLCK1 mM),Bestatin1 mg/ml)、Pestatin A1 mM),EDTA1 mM)以及E-643 mg/ml),以上这些蛋白酶抑制剂对rTEV的活性没有影响;2Zn离子(>5 mM)对rTEV活性有抑制;3)与半胱氨酸反应的试剂也是rTEV的潜在抑制剂。

 

表达方式: A DNA sequence encoding the TEV Protease NP_062908 Gly 2038- Gly 2280 was fused with polyhistidine tag at the N-terminus, with a Ser 2256 Asn mutation

种属:Human

表达宿主: E.Coli

QC Testing

纯度:> 95%, as determined by SDS-PAGE

内毒素:< 1.0 EU per 1μg cytokine as determined by the LAL method.

稳定性:Samples are stable for up to twelve months from date of receipt -70°C

预测N: Met 1

分子量:The recombinant human TEV protease consists of 251 amino acids and has a predicted molecular mass of 28.6 kDa. As estimated in SDS-PAGE under reducing conditions.

缓冲液: Supplied as a 0.2μm filtered solution of 50mM Tris, 10%Sucrose,5mM DTT pH8.0

SDS-PAGE:

Usage Guide

储存方法:Store it under sterile conditions at -70. It is recommended that the protein be aliquoted for optimal storage and usage. Avoid repeated freeze-thaw cycles.

 

特性:

特异性:TEV蛋白酶具有高度特异性,能够选择性地剪切含有特定识别序列(如Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-GlnGly/Ser7)的多肽链,而不会引起非特异性剪切或其他与剪切位点无关的酶活性。

催化效率:TEV蛋白酶的催化效率很高,能够在短时间内实现蛋白酶解反应。

稳定性:TEV蛋白酶具有较好的耐热性和耐酸碱性,可以在不同的反应条件下工作。

活性:TEV蛋白酶在低温下也具有活性,并且其突变体具有自溶耐受性。

 

应用:

重组蛋白表达系统:TEV蛋白酶常用于从融合蛋白中去除亲和纯化标签,如GSTHis等,从而得到纯化的目标蛋白。

结构生物学研究:在结构生物学研究中,TEV蛋白酶可用于切割目标蛋白分子中特定的位点,以便于分子结构的研究。

蛋白酶解研究:TEV蛋白酶还可用于研究蛋白质酶解过程中的底物选择性、酶解位点、速率等相关问题。

 

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