液体样本甘油酶法测定试剂盒的原理
描述：甘油是甘油三酯的水解产物。脂蛋白酯酶能够水解血
液中的甘油三酯；胰脂酶可以水解食物中的甘油三酯；激素
敏感脂肪分解酶能够水解脂肪细胞中的甘油三酯。与游离脂
肪酸一样，甘油含量是甘油三酯水解反应的可靠检测指标，
但检测更加方便。本试剂盒采用甘油磷酸氧化酶法与经典的
GPO-Trinder 酶学反应方法，通过比色测定液体样本中的甘
油含量。经过优化后，操作步骤更加简单，检测线性范围在
10-1200µmol/L，可靠性和重复性俱佳，适合生物医学、食
品实验室检测。
原理：在 ATP 存在下甘油被甘油激酶磷酸化为 3-磷酸甘油，
再被甘油磷酸氧化酶氧化产生过氧化氢；在过氧化物酶作用
下生色底物转化为苯醌亚胺，其光密度值与甘油浓度成正
比。
适用范围：测定血液、细胞培养基、体液、酒类饮料中的甘
油浓度。
组成 ：（以 250 次为例）
(1) R1 试剂 40 ml
(2) R2 试剂 10 ml
(3) 4 mmol/L 甘油标准品 1 ml
4 ºC 保存，6 个月有效
所需设备：酶标仪、生化分析仪或 721、722 型可见光分光
光度计。工作波长 550nm，如无此波长建议优先选用
570nm、次选 530、490nm。
一 样本处理：
1. 酒类、饮品、清澈液体样本：可直接进行测定，如超过
线性范围可用蒸馏水或生理盐水稀释后再进行测定。
2. 培养液：取不含酚红、无颜色、无血清的细胞培养基，
如有细胞碎片应 4ºC,，12,000g 离心 5min,取上清进行测
定。
3. 血液：对于新鲜抗凝血而言，可 4ºC，2,000g 离心 5min
得到血浆；而对于非抗凝血来说，可先 4ºC 静置 2h 得
到血清后，2000g 离心 10min,除去血细胞。将得到的血
浆/血清 70ºC 加热 10 分钟灭活內源脂肪酶，12,000g
离心 10min ,去上清进行测定或-20ºC 保存。
二 工作溶液配制：按 4:1 比例，取 4 ml 试剂 R1 与 1 ml 试
剂 R2 混合即可，立即使用或 4ºC 保存<1 天，变色弃去。
三 标准品稀释：用蒸馏水、生理盐水或与样品缓冲液一致
的液体，将 4 mM 甘油标准品倍比稀释为 1000、500、
250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125 µmol/L，通常
取其中 4~6 管即可，注意设置 0 浓度对照反应管。
四 甘油浓度测定：
1. 参见下表进行加样。为使反应时间尽量一致，减小实验
误差，可先加入标准品、待测样品，然后再加入工作溶
液。（注意：当甘油浓度较低时，可将待测样品与工作
溶液按照 100µl:100µl 体积进行混合，然后再进行测定，
但是如果样品体积超过 100µl 时将会稀释工作液中酶
的浓度，致使反应灵敏度下降。如果待测样品浓度超过
线性范围的时候，可进行适当稀释，然后根据稀释倍数
来计算样品中甘油浓度。）
2. 37ºC 或 25ºC 反应 15 分钟。反应平衡后颜色在 60 分钟
内稳定。
3. 先用蒸馏水+工作液的空白管调零，然后测定各管 OD
值。
4. 绘制标准曲线并计算甘油浓度。
附 Excel 作图步骤：各标准管 OD 值为 y 轴，标准品浓
度为 x 轴。(1)鼠标左键圈住数据，点击做图向导，选
择-散点图-，点击-完成-。(2)鼠标右键点图上的某一
点，点击-添加趋势线-，点击-选项-，点击-显示公式-
和-R 2值-。
表一：
酶标微板测定的加样比例（检测范围 10-1200µmol/L）
（可对样品和工作液比例进行微量调整）
液体样本甘油酶法测定试剂盒的原理
原创作者：南京信帆生物技术有限公司
