EDTA脱钙液操作指南！

阅读次数：4196 发布时间：2022/1/14 16:16:29

EDTA脱钙液操作指南！

EDTA脱钙液主要由12.5%EDTA二钠盐、磷酸盐等组成,pH值为7.2。脱钙后,对组织结构损害小,但脱钙速度慢。

产品名称：EDTA脱钙液

产品规格：500ml

储存条件：室温

有效期：12个月

EDTA是一种重要的络合剂。在组织切片过程中，一些组织内含有骨质或钙化灶时，含钙的组织不宜直接用石蜡包埋切片。这是因为钙和石蜡之间的密度不同，较难切出完整的切片。对含钙组织zui好固定之后，再进行脱钙或二者同时进行。然后进行下游操作如脱水、透明、浸蜡、包埋、切片。用于脱钙的试剂很多，脱钙剂包括有机酸、无机酸、乙二胺四乙酸(EDTA)以及电解法脱钙。

EDTA是一种相对较好的螯合脱钙剂，对组织结构影响*小，可以较好的保存组织的某些酶类，经EDTA脱钙后的组织可以进行免疫组化和原位杂交染色，但是该法脱钙速度太慢，一般脱需要数周至数月。

实验步骤（仅供参考）：

1、骨组织脱钙时，取材不易过厚，一般大约5mm。

2、组织固定后，用PBS清洗3次，每次20min。

3、组织用蒸馏水洗清洗3次，每次20min。

4、组织转移至20～30倍体积的EDTA脱钙液中，脱钙10～30天或更长时间。如果想加快脱钙速度，可以置于37°C进行脱钙。如果必要，更换新的EDTA脱钙液继续脱钙，多数组织脱钙2周～3个月即可，每周更换一次，直至终点。亦可采用微波快速脱钙法：微波炉设在200W左右的档位，每次加热5min，依据组织厚度和密度重复3～5min，中间间隔3～5min。

5、用蒸馏水冲洗数次。

6、常规脱水、包埋。

注意事项：

1、厚度5mm的骨组织块脱钙时间一般脱钙10~30天即可，大多数在14～60天即可。

2、适当加温能加快脱钙的速度，一般不应超过37～40°C，温度过高容易使骨组织造成松散解体，尤其不可大于60°C。

3、脱钙应澈底，防止脱钙不足或过度。脱钙程度应控制在不影响组织切片的同时尽量缩短脱钙时间，以免脱钙过长引起组织损害。

4、脱钙用具避免使用金属容器，尽量使用玻璃容器。

5、骨组织脱钙应先固定后脱钙或脱钙固定同时进行，不应先脱钙后固定，以便减少组织的损伤程度。6、每隔一段时间检测一次脱钙程度，脱钙过度会增加组织的损伤程度，影响染色结果。

7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作

原创作者：南京信帆生物技术有限公司